BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl。在50-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween-20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT)低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用本公司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0004)。本试剂盒可以检测500个样品。

包装清单:

保存条件:

BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准-20ºC冻存。1年内有效。

注意事项:

①需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。

②需96孔板。

③如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请使用本公司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(PR004)。

④为加快BCA法测定蛋白浓度的速度可适当用微波炉加热，但是切勿过热。EDTA浓度必须小于10mM，不兼容EGTA。不适用BCA法时，请使用本公司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(PR004)。

⑤为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:

①蛋白标准品的准备:完全溶解蛋白标准品，取10μl稀释至100μl，使终浓度为0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中，标准品也应用什么溶液稀释。但为了简便，也可用0.9% NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准可-20ºC长期保存。

②BCA工作液配制：根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml BCA试剂A加100μl BCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室温24小时内稳定。

③蛋白浓度测定：a. 将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20μl，相当于标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。b. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足20μl，需加标准品稀释液补足到20μl。c. 各孔加入200μl BCA工作液，37ºC放置20-30分钟。注: 也可室温放置2小时，或60ºC放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应会因温度升高而加快。如果样品浓度较低，适合在较高温度孵育或适当延长孵育时间。d. 用酶标仪测定A562，或540-595nm之间的其他波长的吸光度。

e. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品的蛋白浓度。