本试剂盒包含基因组DNA粗提取及PCR反应所需试剂，适用于小鼠基因型快速鉴定。应用本试剂盒仅需要极少量小鼠组织（如鼠尾、耳朵及脚趾等）即可完成DNA提取，产物可直接进行PCR扩增。实验过程快速、简单，无需酚氯仿等有毒试剂，缩短了检测时间。试剂盒中配备的PCR反应试剂具有优化的反应体系，实验时只需加入引物和模板，使实验操作更加方便。PCR产物3’端含A，可直接进行TA克隆实验。本试剂盒可提取200个样品。

包装清单:

保存条件:

    1×Tissue Lysis Buffer (ML0606A)4℃保存，Proteinase K (ML0606B)、2×PCR Master Mix (ML0606C)和无菌ddH2O (ML0606D)均为-20℃保存。

使用说明:

应用于转基因小鼠及基因敲除小鼠基因型检查。

①DNA提取。推荐使用组织量：小鼠鼠尾3-5mm；小鼠脚趾2-3个；小鼠实体组织5-10mm3。根据样品个数配制适量的裂解液，单个样品所需裂解液配制如下：

              1×Tissue Lysis Buffer         200 μl

              Proteinase K                     4 μl

    将上述配制好的裂解液加入含有组织样品的EP管中，55℃水浴中振荡孵育30min，裂解后涡旋振荡1min。将裂解产物置于95℃或者沸水浴中加热5min。裂解产物涡旋振荡充分混匀后，12000g离心5min，上清即可用于PCR反应。将上清转移到新管中，-20℃可保存2-3个月。

②PCR扩增。配制反应体系：将2×PCR Master Mix在冰上完全解冻，颠倒混匀，反应体系：

                     2×PCR Master Mix            25 μl

                     引物1（10uM）                 2 μl

                     引物2（10uM）                 2 μl

                     裂解上清                    2-5 μl

                     ddH2O                     to 50 μl

推荐的反应条件：

                      1.94℃                      5min

                      2.94℃                      30sec

                      3.Tm值 - (3～5℃)*          30sec      

                      4.72℃                      30sec*

                      5.72℃                      8min

                      2-4步骤35个循环 

    *PCR反应退火温度需根据引物Tm值进行调整，一般设置为低于Tm值3～5℃。72℃延伸时间根据产物长度设定（1kb/min）；一般设置为500bp需要30sec。

③PCR扩增产物直接进行琼脂糖凝胶电泳，无需添加DNA loading buffer，2×PCR Master Mix中已含有loading buffer。

注意事项:

①当提取出的DNA量不够满足后续实验需要时，可延长组织裂解时间。

②组织裂解时，务必将整个组织浸没于裂解液中，以保证DNA释放效率。

③反应步骤95℃处理5min，为灭活Proteinase K，此步骤必须进行，否则会影响后续PCR反应。

④PCR反应体系配置过程尽量在冰上完成，以保持较高的PCR反应酶活性。

⑤裂解上清在PCR反应中加入的量不应超过PCR反应体系总体积的1/10。